herzbeginnt

[herzbeginnt]

Оптическая плотность ДНК

Опти́ческая пло́тность (экстинкция[1]) — мера ослабления света прозрачными объектами (такими, как кристаллы, стекла, фотоплёнка) или отражения света непрозрачными объектами (такими, как фотография, металлы и т. д.).

Вычисляется как десятичный логарифм отношения потока излучения падающего на объект, к потоку излучения прошедшего через него (отразившегося от него), то есть это есть логарифм от величины, обратной к коэффициенту пропускания (отражения)[2]:

Нуклеиновые кислоты определенным образом поглощают ультрафиолет. В спектрофотометрах образец подвергается действию ультрафиолета с длиной волны 260 нм, а фотодетектор измеряет количество света, прошедшего через образец. Чем больше света поглощено, тем выше концентрация нуклеиновой кислоты в образце.

При помощи закона Бугера — Ламберта — Бера возможно соотнести концентрация молекул, поглощающих излучение с количеством поглощенного света. На длине волны 260 нм средний коэффициент экстинкции для двуцепочечной ДНК составляет 0,020 (мкг/мл)−1 см−1, для одноцепочечной ДНК 0,027 (мкг/мл)−1 см−1, для одноцепочечной РНК 0,025 (мкг/мл)−1 cm−1 и для коротких одноцепочечных олигонуклеотидов коэффициент экстинкции зависит от длины и соотношения азотистых оснований (около 0,030 (мкг/мл)−1 cm−1). Отсюда, оптическая плотность (англ. OD, optical density) равная 1 соответствует концентрации двуцепочечной ДНК около 50 мкг/мл. Спектрофотометрический способ определения концентрации нуклеиновых кислот применяет при концентрациях до 2 OD.[1] Более точные коэффициенты экстинкции требуются для определения концентрации олигонуклеотидов, и могут быть предсказаны при помощи модели ближайшего соседства.[2]

Коэффициенты пересчета

Тип нуклеиновой кислоты        Концентрация (мкг/мл) для 1 единицы A260 dsDNA (двуцепочечная ДНК)   50 ssDNA (одноцепочечная ДНК) 37 ssRNA (одноцепочечная РНК) 40

[herzbeginnt]

Буферный раствор

Буферные растворы (англ. buffer, от buff — смягчать удар) — растворы с определённой устойчивой концентрацией водородных ионов. рН буферных растворов мало изменяется при прибавлении к ним небольших количеств сильного основания или сильной кислоты, а также при разбавлении и концентрировании.

Принцип действия буферных систем

Буферные системы представляют из себя смесь кислоты (донора протонов) и сопряженного с ней основания (акцептора протонов), то есть частиц, различающихся на {\displaystyle {\ce {H+}}}. В растворе устанавливаются равновесия:

(автопротолиз воды) 

(диссоциация кислоты, заряды поставлены условно, из предположения, что кислота является нейтральной молекулой)

Каждое из этих равновесий характеризуется своей константой: первое — ионным произведением воды, второе — константой диссоциации кислоты.

При добавлении в систему сильной кислоты, она протонирует основание, входящее в буферную смесь, а добавление сильного основания связывает протоны и смещает второе равновесие в сторону продуктов, при этом в итоге концентрация H+ в растворе меняется незначительно.

Буферные системы

1. Слабая кислота и ее соль. Например, ацетатный бу­ферный раствор СН3СООН + CH3COONa.

2. Слабое основание и его соль. Например, аммиачный буферный раствор NH4OH + NH4C1.

3. Раствор двух кислых солей. Например, фосфатный буферный раствор NaH2PO4 + Na2HPO4. В этом случае соль NaH2PO4 играет роль слабой кислоты.

4. Аминокислотные и белковые буферные растворы

Буферное действие этих буферных систем начинает проявляться при добавлении к ним некоторого количества кислоты или щелочи. Образуется смесь двух форм белка:

а) слабая «белок-кислота»+соль этой слабой кислоты 

б) слабое «белок-основание»+соль этого слабого основания

[herzbeginnt]

Даня, привет

дорогой мой друг, читая это, всегда помни, что все, что я хочу создать здесь - дом, в котором любят.

заходи без спроса,

я так тебя ждал.